實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>生物DNA樣本組織的超聲打斷;對(duì)于一些動(dòng)植物組織樣本的實(shí)驗(yàn)檢測(cè),需要將其打斷到200~300bp,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)測(cè)序分析。
實(shí)驗(yàn)客戶:杭州聯(lián)川生物技術(shù)股份有限公司,主要提供二代測(cè)序科技服務(wù)、高通量芯片表達(dá)譜分析、大數(shù)據(jù)生物信息分析及軟件、高通量寡核苷酸合成、分子生物學(xué)與臨床檢測(cè)試劑,以及VariantPro靶向文庫制備系統(tǒng)。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:非接觸超聲波DNA打斷儀XM-150A雙通道
實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1.準(zhǔn)備XM-150A單槽一臺(tái),冷水機(jī)一臺(tái),0.1ml適配器一個(gè),0.1ml離心管若干,需打斷的dna樣本若干
2.將適配器放入水槽,打開冷水機(jī)預(yù)冷至4度
3.將稀釋好的dna樣本每樣100微升放入0.65ml的離心管蓋蓋編號(hào),震蕩離心
4.將dna樣本放入適配器(注意平面配平,盡量將樣品放置在適配器外圈,內(nèi)圈同一樣本重復(fù)放置兩個(gè)進(jìn)行對(duì)比)
5.能量設(shè)置100%,工作20s間隙10s循環(huán)工作,總時(shí)長14min
6.工作完成后重復(fù)樣本取出一個(gè),另一重復(fù)樣本繼續(xù)能量設(shè)置100%,工作20s間隙10s循環(huán)工作,總時(shí)長3min
7.樣本全部取出,進(jìn)行后續(xù)跑膠測(cè)試
樣本準(zhǔn)備:
樣品處理完成:
樣品實(shí)驗(yàn)跑膠結(jié)果:
左側(cè)為打斷總時(shí)長為14min的樣品,前兩個(gè)為外圈樣品;右側(cè)為打斷總時(shí)長為17min的樣品,前兩個(gè)為外圈樣品
為更好地解決老師樣本內(nèi)外圈打斷不均一的實(shí)驗(yàn)問題;此次實(shí)驗(yàn)更換調(diào)整了儀器內(nèi)的純水,設(shè)置了不同時(shí)長的變量,對(duì)結(jié)果并無明顯影響,后續(xù)考慮再次測(cè)試儀器內(nèi)水位高低對(duì)樣品打斷結(jié)果的影響。
實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):
1.樣本的體積注意不能過多,導(dǎo)致儀器內(nèi)水位不能完全沒過樣品。
2.適配器需要配平,不能讓適配器壓蓋有所傾斜,導(dǎo)致樣本開蓋污染。
3.同等條件下人體dna打斷難度大于小鼠大于植物,需要根據(jù)樣本調(diào)整儀器工作總時(shí)長
4.冷水機(jī)需要提前打開預(yù)冷
5.水流循環(huán)要調(diào)整穩(wěn)定不能過于激烈